為了確定在PDAC中激活的中性粒細胞中的潛在信號通路，并可能作為調節癌癥中性粒細胞功能的治療靶點，我們使用市售激酶分析陣列來監測196種酪氨酸誘餌肽的磷酸化。我們從健康小鼠中分離出BM，通過磁耗竭富集中性粒細胞，然后用來自胰腺癌細胞系KPC mT4（KPC-CM）的條件培養基刺激細胞1小時，并使用中性粒細胞蛋白裂解物進行激酶分析�；陔牧姿峄�，通過基于組的預測系統預測相應激酶的活性.我們發現非受體酪氨酸激酶FES，BTK，JAK1，EphA8和EphB1在KPC-CM刺激的中性粒細胞中被激活。JAK或BTK信號傳導的抑制先前已在臨床前PDAC模型中得到證實.我們還從KPC小鼠模型中分離了骨髓中性粒細胞（KrasLSL-G12D/+;Trp53LSL-R172H/+;Pdx1-Cre）與胰腺腫瘤，并證明與來自無腫瘤對照小鼠的中性粒細胞相比，FES是活性顯著增加的激酶組之一有趣的是，最近有報道稱，勞拉替尼（PF-06463922）是FDA批準的ALK抑制劑，可有效抑制FES.為了測試勞拉替尼是否可以抑制中性粒細胞中的FES活性，我們在勞拉替尼或載體存在下用KPC-CM刺激中性粒細胞1小時，并使用分析陣列來確定激酶活性。我們發現勞拉替尼基于陣列中誘餌肽的磷酸化模式降低了FES的活性。
勞拉替尼（Lorlatinib）可以抑制PDAC細胞激活中性粒細胞中的FES激酶
假設勞拉替尼抑制FES信號傳導會導致STAT蛋白磷酸化減少。事實上，當我們在用KPC-CM刺激的中性粒細胞中加入勞拉替尼時，我們觀察到STAT5的磷酸化減少，而STAT3的磷酸化沒有觀察到變化。我們確定Fes在原位PDAC腫瘤的CD11b +分選髓系細胞中表達。我們通過分析從KPC小鼠模型中的胰腺腫瘤中分選的中性粒細胞（Ly6G）、單核細胞（Ly6C）和巨噬細胞（F4/80）中的Fes表達，進一步證實了Fes在中性粒細胞中的表達水平最高。為了確定勞拉替尼如何調節中性粒細胞，我們通過將新鮮分離的BM中性粒細胞接種在轉孔插入物中，將KPC-CM作為化學引誘劑接種在底部室中來測試中性粒細胞遷移。我們觀察到，與載體相比，勞拉替尼減少了響應KPC-CM的中性粒細胞遷移。為了探索勞拉替尼治療的中性粒細胞對癌細胞生長的影響，我們在勞拉替尼或載體存在下，在KPC-CM中培養表達zsGreen的KPC mT4細胞和新鮮分離的BM中性粒細胞。共培養2天后，我們固定細胞并量化zsGreen細胞的數量。
雖然我們沒有看到勞拉替尼對沒有中性粒細胞存在的zsGreen+細胞數量有任何影響，但我們發現與載體相比，勞拉替尼減少了中性粒細胞共培養物中KPC mT4細胞的數量.我們使用細胞活力測定確認勞拉替尼不會抑制KPC細胞的增殖。最后，為了確認勞拉替尼對中性粒細胞功能的影響不是由直接誘導細胞死亡引起的，我們分離了BM中性粒細胞，并在細胞培養2天后在勞拉替尼存在下測定了它們的活力。如前所述，中性粒細胞活力在常規細胞培養基中下降非�？�，在第2天無法檢測到。然而，當細胞在KPC-CM，GM-CSF或G-CSF中培養時，我們能夠挽救中性粒細胞活力。重要的是，在任何一種情況下，勞拉替尼的存在都不會降低中性粒細胞的活力。綜上所述，這些結果表明PDAC細胞在體外誘導中性粒細胞中的FES活性，并且勞拉替尼可用于靶向PDAC中的腫瘤相關中性粒細胞。
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